Ⅱ型胶原诱导的小鼠类风湿关节炎模型

动物：雄性DBA1/J 小鼠 (6–8 周)

Ⅱ型胶原：

Ⅱ型胶原（typeⅡ collagen, CⅡ）以冻干粉形式购买，将其溶解在乙酸（10mM）中，通过温和搅拌数小时至过夜获得所需浓度（2-4 mg /ml）。当胶原蛋白溶解后，将其分为等份，冷冻-70℃。试剂和玻璃器皿应预先4℃冷却避免使CⅡ变性，注意搅拌板处于开启状态，在寒冷的房间里也不会产生热量。

乳化液的制备：

1.计算制备乳化液所需的胶原蛋白和完全弗氏佐剂（Complete Freund adjuvant, CFA）的体积，比例为1:1，每只小鼠需要50μl乳化液。

注意事项：使用组织匀浆器进行乳化，乳化过程中，尽可能将所有试剂放在冰上。保持试剂低温可防止CⅡ变性，这对于在小鼠模型中诱发高发病率至关重要。

2. 将胶原蛋白一滴一滴地添加到CFA中，同时以中速混合乳化液，保持在低温下操作。

3. 从匀浆器中取出乳化液，确保乳化液完全混合，外观和粘度与搅打奶油相同。如果乳化程度不令人满意，则进一步用匀浆器混合以提高乳化液质量。

4. 将乳化液转移到1毫升注射器中进行免疫接种。

建模：

    麻醉小鼠，选择距尾基部约1.5cm的注射部位，慢慢地将50μl乳化液皮内注射（i.d.）至尾部。二次免疫有时在接种后14或21天，以确保高发病率，所用的CⅡ浓度与初次免疫的相同；但是，CⅡ在不完全弗氏佐剂（Incomplete Freund adjuvant, IFA）中乳化用于此免疫。注射部位同样位于尾部，靠近初次注射部位。

模型评估：

每周对小鼠进行两到三次关节炎发病率评估。每个爪子应在0-4分的范围内进行评估和单独评分，4分表示最严重的炎症。

0分：没有红斑和肿胀的迹象。

1分：局限于跗骨或踝关节的红斑和轻度肿胀。

2分：从脚踝到跗骨的红斑和轻度肿胀。

3分：从脚踝到跖骨关节的红斑和中度肿胀。