蛋白实验检测常见问题及解答，一起来了解一下！

　    蛋白实验检测常见问题及解答
       问题1：为什么选择内参？
　　内参也叫看家基因，在组织或细胞中都会表达，且表达量在不同组织或细胞中几乎是相同的，一般有α-Tublin，β-actin，GAPDH等，在WesternBlotting中使用内参其实就是在WB过程中的另外用内参对应的抗体检测内参。其作用有二：
　　1.是看提取蛋白质量的好坏。如果做western的时候，内参照蛋白有条带，而目的蛋白没有，说明蛋白的提取和转膜等步骤没有问题，是目的蛋白的抗体质量不好或者是稀释倍数不对。
　　2.是比较客观的说明目的蛋白的表达情况，消除上样量等的误差。不同的样品之间由于蛋白提取的量有差别，可能强阳性的表达跑出来的带很弱。因此设立内参照，比较不同样品之间的表达情况。
　　问题2：为什么检测的背景比较高？
　　1.可能抗体浓度浓度较高。
　　2.抗原量较大。
　　3.一张膜中有的目的条带较弱，为了能让较弱条带显示出来，曝光时间较长。
　　问题3：为什么检测无信号？（白板）
　　大概总结为以下几类原因：
　　1.样品中目的蛋白丰度很低，低于实验的检测下限。
　　3.蛋白降解。
　　4.待测样品的确为阴性。
　　5.一抗失效。
　　6.抗原量不足，每泳道蛋白上样量不低于0.1ug。
　　问题4：为什么检测的结果分子量大小与实际不符？
　　1.翻译后修饰-比如蛋白的磷酸化，糖基化等，这些都会增加蛋白的分子量大小。
　　2.翻译后剪切-比如很多蛋白首先被合成为前体形式，然后通过剪切获得生物学活性。
　　3.剪切变异体-相同的基因，经过选择性剪接会产生不同分子量大小的蛋白。
　　4.相对电荷-氨基酸的组成（带电vs不带电）。
　　5.多聚体-比如蛋白二聚体。