新生小鼠原代心肌成纤维细胞的分离与培养

1. 准备0-1天内的C57BL/6J小鼠新生鼠。

2. 用温的无菌去离子水，轻轻擦拭每只新生鼠。

3. 用70%的乙醇彻底去除新生鼠身体上的污染物。

4. 断头，取心脏，心脏置于冰的PBSG溶液中。

5. 除去血液和非心脏组织。

6. 剪碎心脏组织。

7. 加入胰酶-胶原酶消化液，每只新生鼠75ul。

8. 在37°C的摇床培养箱中，以250 rpm/ 5 min，消化心肌组织。

9. 轻轻涡旋，然后离心10秒，丢弃第一次消化的上清液。

10. 开始第二次消化，250 rpm/ 5 min后，轻轻涡旋，然后离心10秒，收集上清液到2倍体积的胎牛血清中。

11. 重复上述消化过程，共进行8次消化，收集细胞悬液。

12. 使用没有包被的10cm大皿，预种植细胞1h。

13. 1小时后，将培养皿从培养箱中取出，移除没贴壁的细胞及上清液，加入完全培养基继续培养。